高分辨分子量与MALDI-TOF分子量两种方法的差异?

高分辨分子量通过液质联用的方法,通过C4色谱柱的保留分离,(前10Min有 Load过程,相当于脱盐),带电范围M/Z 400-4000,可带多电荷。误差较小。MALDI-TOF通过带一个电荷,离子化方式通过激光激发检测。两者在3000Da以下的分子量检测精度和误差上没有区别,可选择MALDI-TOF测试。对大分子,3000Da以上的可以选择高分辨,误差较小。高分辨分子量对样品要求较高,需要纯度较高,糖基化等修饰少。

是否所有蛋白质都适合质谱法C端测序?

不是所有的蛋白质都能进行质谱法C端测序,首先要有理论序列。其次,有些蛋白没有合适的酶来切到合适的片段,切到的肽段太大(25个氨基酸以上)或太短(7个氨基酸以下),都不太适合质谱检测,那么找到C端肽段的机会会很小。

硫键检测不到的原因?

1. 样品中的理论配对方式的可能含量很低,或者酶切之后的肽段量低于质谱检测线,所以无法被质谱检测器检测到。 2. 样品中存在理论配对方式不符的状况,无法和理论的配对方式进行匹配。 3. 质谱检测对肽段分子量大小有限制。一般M/Z比值在300-1800之间,且容易被离子化的片断才能被检测到。所以某些酶切之后肽段过小或者过大,或者肽段离子化效率很低,质谱无法进行检测。

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