不知道理论二硫键配对方式,是否可以从实验中判断理论配对方式?

没有理论配对方式,试验结果无法进行判断是否和理论一致。

N端测序含有多个亚基的蛋白质怎么测序?

含有多个亚基的蛋白质由于不止一个N端,在测序时会与多个含有游离a氨基结合并裂解下来,导致每个循环的图谱上出现多个峰,影响序列的判断。所以,对于含有多个亚基的蛋白质,我们通常通过还原性电泳,将不同的亚基分开,再通过电转印将不同的亚基转到PVDF膜上,分别进行N端测序。也可以将样品用还原剂还原后,通过HPLC分离各亚基,收集各亚基分别进行N端测序。

N端测序样品中为什么不能含有甘氨酸或其他游离氨基酸?应该怎么处理?

蛋白质样品有时候为了稳定而添加了保护剂,如果样品中添加了游离氨基酸,在测序时会造成污染。可以对样品进行透析等处理,去除干扰物。

N端测序含有非标准氨基酸的序列在图谱上怎么反映?

由于标准品是由19种天然氨基酸组成,每个循环裂解下来的氨基酸都跟标准进行比对,从而实现定性。如果样品中含有非标准氨基酸,裂解下来的峰将会和所有19种氨基酸都对不上,从而无法判断。

N端测试各个循环均无峰的原因分析?

样品N末端存在封闭或者发生修饰,无法进行正常反应,所以后续循环均不出峰。或者样品中蛋白质含量太低,无法进行测定。

同一样品N端测试与电转印之后的N端测试结果有何差异?

样品纯度未达到标准,导致直接测试时出峰较杂,无法判断。电转印+N端相当于纯化的过程,将目标部分进行测试,经过纯化的样品杂峰较少,故可以判断各个循环。

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